紫外分光光度計(jì)測(cè)DNA濃度的原理及步驟
發(fā)布日期：2017-04-17 瀏覽次數(shù)：14267
使用紫外分光光度計(jì)的原理可測(cè)的DNA的濃度與純度，它的原理是：
核酸的大吸收波長(zhǎng)為260nm，蛋白質(zhì)為280nm，在波長(zhǎng)260nm時(shí)，1OD值相當(dāng)于雙鏈DNA濃度為50μg/ml，單鏈寡核苷酸的含量為30μg/ml，可以據(jù)此來(lái)計(jì)算核酸樣品的濃度,還可通過(guò)測(cè)定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估計(jì)核酸的純度。純凈DNA的比值為1.8,RNA為2.0。若比值高于1.8說(shuō)明DNA樣品中的RNA尚未除盡，若樣品中含有酚和蛋白質(zhì)將導(dǎo)致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干擾。紫外分光光度計(jì)只能用于測(cè)定濃度大于0.25μg/ml的核酸溶液，對(duì)濃度更小的樣品，可采用熒光分光光度法。
具體操作步驟：
1.紫外分光光度計(jì)先用水在260nm和280nm兩個(gè)波長(zhǎng)下校零。
2.取質(zhì)粒DNA樣品2μl，用水稀釋100倍，轉(zhuǎn)入紫外分光光度計(jì)的石英比色杯中。
3.在260nm和280nm分別讀出樣品光密度值。如果樣品濃度單位為μg/μl，則樣品DNA濃度為OD值的10倍。
4.若OD＜SUB＞260＜/SUB＞/OD＜SUB＞280＜/SUB＞大于1.8，說(shuō)明仍有RNA，可以考慮用RNA酶處理樣品，若小于1.8，說(shuō)明樣品中含有蛋白質(zhì)或酚，應(yīng)再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀純化DNA。
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